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USP<1227>無菌試驗方法驗證

#1
TB 發表於 2022 / 05 / 25
實驗室的無菌方法驗證是使用無菌套管(雙濾罐)系統執行三重複試驗,因一組套管有兩個杯座,故操作是以雙濾罐系統"執行兩次",共有四個杯座,取三個杯座充填培養基,視為三重複操作。 就USP<1227>而言,是指操作”程序”應獨立執行三次,就上述方法程序是否為獨立”操作兩次”,故不符USP<1227>程序;是否需修改為獨立執行三次,共有6個杯座須充填培養基,並執行培養觀察。 抑或是微生物驗證須執行獨立三次,在不同天的三天期間,各自獨立執行一次,視為獨立操作3次。
管理員回覆
首先說明藥典以及GMP的要求:
  1. 中華藥典(第九版)通則(3071)無菌試驗法 二、抑菌性與抑黴菌性之確效試驗方法及USP <71> Sterility Tests的要求為 Method Suitability Test,雖然名稱不一樣但內容相似,而且沒有執行三次連續成功的確效要求,僅要求當方法適合性試驗失敗時,需將檢品中和、稀釋、或過濾潤洗的改善方法。
  2. 理論上,藥典提供的方法都經過確效,如果完全依照藥典的作業作業程序(例如試驗程序、培養基、菌種、培養條件…等)是不用執行確效的,僅須對各個產品執行方法適合性試驗或方法確認(Method Verification)。但檢驗方法與藥典不同時,可能需要執行方法確效。摘錄USP <71>執行方法適合性試驗的要求供參考:”This method suitability is performed (a) when the test for sterility has to be carried out on a new product; and (b) whenever there is a change in the experimental conditions of the test. The method suitability may be performed simultaneously with the Test for Sterility of the Product to be Examined.”
  3. 方法適合性試驗是一種帶菌試驗,通常不建議在無菌試驗室執行,以免造成無菌室被汙染的風險。建議在有圍堵功能的環境之生物安全櫃(BSC)內操作。
其次針對提問需要先釐清以下幾點:
  1. 是使用拋棄式封閉系統無菌套管(雙濾罐)系統(例如: steritest等)產品,來執行無菌試驗sterility test的方法確效確效(Validation在臺灣的中譯為確效,非確效),對嗎?
  2. 從所述使用情況與一般正常無菌試驗使用時,有些不同。想先將操作方式略述於下,提供參考。
    1. 首先使用蠕動Pump將檢品液經無菌管路流過標示好的「雙濾罐」並經兩個杯座排除檢品液。
    2. 以指定適當緩衝液清洗「雙濾罐」分別約100 mL,3至5次。
    3. 注意:兩種培養液個別填充至「雙濾罐」之一。
    4. 首先將「雙濾罐」之一的進入管路,用所附的夾子夾住。
    5. 再將另一「濾罐」之下方出口,用所附的塞蓋蓋住,並將上方空氣過濾器的蓋子鬆開。取一種培養液瓶插入無菌管路針頭,使用蠕動Pump將培養液送入「濾罐」中,再將上端管路用夾子夾住。
    6. 另一「濾罐」按照前述步驟開啟管路與上方空氣過濾器,並封閉下端出口。再執行另一種培養液的填充。
From: https://www.merckmillipore.com/TW
 
  1. 「雙濾罐」分別填充不同培養液完成後,取無菌剪刀將管路剪斷,將管路分別插入個別「濾罐」上方空氣過濾器的插嘴上,送培養。
From: https://www.merckmillipore.com/TW
  1. 所以建議和設備供應商確認一下正確的操作程序。
 
  1. 回到無菌試驗方法確效的問題上,「就上述方法程序是否為獨立”操作兩次”,故不符USP<1227>程序」,是的,是不符合獨立”操作兩次”。
  2. 因為是執行方法確效所以兩種培養基分別指定需加入(不超過100 cfu)下列菌種進行試驗:
Fluid Thioglycollate MediumClostridium sporogenesPseudomonas aeruginosa, and Staphylococcus aureus.
Soybean–Casein Digest MediumAspergillus brasiliensisBacillus subtilis, and Candida albicans.
  1. 執行一次無菌試驗按照中華藥典或USP是需要同時使用「雙濾罐」。所以會是「雙濾罐」3次。確效試驗兩種培養基需分別加入三種菌,所以僅試驗組就會需要「雙濾罐」3組3次共計9組。
  2. 同時在執行確效時還需要按照USP<1227>包含陰性對照組等相關試驗組,以及每次試驗環境監測,確效試驗才算完整。
「微生物確效須執行獨立三次,可在不同天的三天期間,各自獨立執行一次,視為獨立操作3次。」。其確效重點和精神是在於不同的三次準備和執行中,依然能夠持續達到一致的試驗結果,判定試驗方法的穩定性、一致性等試驗品質要求。

From TPDA
2022/6/16

 

 

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